Реакция иммунофлуоресценции: техника проведения, результаты, цена

Интерпретация результатов

Метод определения Непрямая иммунофлюоресценция

Исследуемый материал Сыворотка крови

Доступен выезд на дом

Серологический тест для диагностики пузырчатки.

Различают простую (вульгарную), вегетирующую, листовидную и эритематозную формы пузырчатки. В основе заболеваний этой группы лежит появление внутриэпидермальных пузырьков, причиной возникновения которых является антитело-опосредованное разрушение десмосом — внеклеточных надмолекулярных структур, которые объединяют между собой клетки кожи.

Десмосомы представляют собой плотные межклеточные контакты, состоящие из множества белков, которые, пронизывая мембрану, объединяют две соседние клетки эпидермиса.

Разрушение десмосом приводит к образованию интраэпителиальных полостей и отделению клеток друг от друга с образованием акантолитических клеток, которые представляют отдельные клетки или группы клеток внутри интраэпидермальных полостей.

Особенностью аутоантител при пузырчатке является способность активировать систему комплемента, в результате чего антитела оказывают прямое цитотоксическое воздействие. Титры антител к десмосомам снижаются при эффективной терапии пузырчатки, что позволяет мониторировать активность заболевания и корректировать иммуносупрессивную терапию. При адекватной терапии титры аутоантител снижаются ниже детектируемых.

Стандартным методов выявления аутоантител к антигенам десмосом является метод непрямой иммунофлюоресценции, который выявляет все разновидности аутоантител. 

Основными антигенами антител к десмосомам являются гликопротеины десмосом — десмоглеин 1 и десмоглеин 3. 

Пациенты с листовидной пузырчаткой имеют антитела против десмоглеина 1 (тест № 1298). При вульгарной пузырчатке и при ее гиперпролиферативном варианте (вегетирующая пузырчатка) отмечаются аутоантитела к десмоглеину 3 (тест № 1299). 

Отличия в патоморфологии высыпных элементов и клинической картине листовидной и вульгарной пузырчатки обусловлены различиями в экспрессии двух основных антигенов. Так, локализация интраэпидермальных полостей в нижних слоях эпидермиса при вульгарной пузырчатке обусловлена экспрессией десмоглеина 3.

Десмоглеин 1 и Десмоглеин 3 синтезируются в верхних слоях эпидермиса, однако Десмоглеин 1 располагается ближе к поверхности кожного покрова и, кроме того, отсутствует в эпидермисе слизистых, что обусловливает расположение высыпаний на коже и их отсутствие на слизистых при листовидной пузырчатке.

  1. Лапин С.В. Тотолян А.А. Иммунологическая лабораторная диагностика аутоиммунных заболеваний. Издательство «Человек», СПб — 2010.
  2. Tietz Clinical guide to laboratory tests. 4-th ed. Ed. Wu A.N.B.- USA,W.B Sounders Company, 2006.
  3. Conrad K, Schlosler W., Hiepe F., Fitzler M.J. Autoantibodies in Organ Specific Autoimmune Diseases: A Diagnostic Reference/ PABST, Dresden – 2011.
  4. Conrad K, Schlosler W., Hiepe F., Fitzler M.J. Autoantibodies in Systemic Autoimmune Diseases: A Diagnostic Reference/ PABST, Dresden – 2007. 
  5. Gershvin ME, Meroni PL, Shoenfeld Y. Autoantibodies 2nd ed./ Elsevier Science – 2006.
  6. Shoenfeld Y., Cervera R, Gershvin ME Diagnostic Criteria in Autoimmune Diseases / Humana Press – 2008.
  7. Материалы фирм-производителей наборов реагентов.

Предпочтительно выдержать 4 часа после последнего приема пищи, обязательных требований нет.

  1. Диагностика и дифференциальная диагностика везикулярно-буллезных заболеваний кожи; 
  2. Диагностика основных форм пузырчатки.

Интерпретация результатов

Интерпретация результатов исследований содержит информацию для лечащего врача и не является диагнозом. Информацию из этого раздела нельзя использовать для самодиагностики и самолечения. Точный диагноз ставит врач, используя как результаты данного обследования, так и нужную информацию из других источников: анамнеза, результатов других обследований и т.д.

Единицы измерения в Независимой лаборатории ИНВИТРО: 

титр (конечное разведение пробы, при котором результат остается положительным).

Референсные значения: 

  1. Пузырчатка и ее основные формы – вульгарная, листовидная и вегетирующая;
  2. Приобретенный буллезный эпидермолиз.
  1. Норма или другое везикулярно-буллезное заболевание кожи;
  2. Эффективная терапия с низким риском рецидива заболевания.

Источник: https://www.invitro.ru/analizes/for-doctors/1476/15664/

22. Реакция иммунофлюоресценции, прямой и непрямой методы. Применение

Реакция иммунофлюоресценции— РИФ
(метод Кунса).

Различают три разновидности метода

  • прямой,
  • непрямой,
  • с комплементом.

Реакция Кунса является
методом экспресс-диагностики
для выявления антигенов микробов или
определения антител.

Прямой метод РИФоснован на том,
что антигены тканей или микробы,
обработанные иммунными сыворотками с
антителами, меченными флюорохромами,
способны светиться в УФ-лучах
люминесцентного микроскопа. Бактерии
в мазке, обработанные такой люминесцирующей
сывороткой, светятся по периферии клетки
в виде каймы зеленого цвета.

Непрямой метод РИФ
заключается в выявлении комплекса
антиген — антитело с помощьюантиглобулиновой (против
антитела) сыворотки, меченной флюорохромом.

Для этого мазки из взвеси
микробов обрабатывают
антителами антимикробной кроличьей
диагностической сыворотки.

Затем
антитела, не
связавшиеся антигенами микробов,
отмывают, а оставшиеся на микробах
антитела
выявляют, обрабатывая
мазок антиглобулиновой (антикроличьей)
сывороткой, меченной

флюорохромами. В результате
образуется комплекс микроб + антимикробные
кроличьи антитела +антикроличьи антитела,
меченные флюорохромом. Этот комплекс
наблюдают в люминесцентноммикроскопе,
как и при прямом методе.

23. Иммуноферментный анализ Ингредиенты, постановка, учёт, оценка. Области применения

I. Радиоиммунный анализ

Радиоиммунный метод, или
анализ (РИА)

высокочувствительный метод, основанный
на реакции антиген — антитело с применением
антигенов или антител, меченных
радионуклидом (125J,
14С, ЗН, 51Сг и др.).

После их взаимодействия
отделяют образовавшийся радиоактивный
иммунный комплекс и
определяют его
радиоактивность в соответствующем
счетчике (бета- или гамма-излучение).

Интенсивность
излучения прямо пропорциональна
количеству связавшихся молекул антигена
и
антител.

Иммуноферментный анализ,
или метод (ИФА)

выявление антигенов с помощью
соответствующих им
антител, конъюгированных
с ферментом-меткой (пероксидазой хрена,
бета-галактозидазной и или щелочной
фосфатазой).

После соединения антигена
с меченой ферментом иммунной сывороткой
в смесь добавляют субстрат/хромоген.
Субстрат расщепляется ферментом и
изменяется цвет продукта
реакции — интенсивность
окраски прямо пропорциональна количеству
связавшихся молекул антигена и
антител.

ИФА применяют
для диагностики вирусных, бактериальных
и паразитарных болезней, в
частности для
диагностики сальмонеллеза, микоплазмозов
и др.

, а также определения гормонов,
ферментов, лекарственных
препаратов и других биологически
активных веществ, содержащихся в
исследуемом материале
в минорных концентрациях-1010 -1012 г/л.

Твердофазный ИФА —
вариант теста, когда один из компонентов
иммунной -реакции (антиген или антитело)
сорбирован на твердом носителе, напр.,
в лунках планшеток из полистирола.
Компоненты выявляют добавлением меченых
антител или антигенов. При положительном
результате изменяется цвет хромогена.
Каждый раз после добавления очередного
компонента из лунок удаляют не
связавшиеся реагенты
путем промывания.

добавляют сыворотку крови больного,
антиглобулиновую сыворотку, меченную
ферментом и субстрат/хромоген для
фермента.

  1. При определении антигена в лунки с сорбированными антителами вносят антиген (напр., сыворотку крови с искомым антигеном), добавляют диагностическую сыворотку против него и вторичные антитела (против диагностической сыворотки), меченные ферментом, а затем субстрат/хромоген для фермента.

Источник: https://studfile.net/preview/3883138/page:13/

Adenovirus, иммунофлюоресценция

[10-034] Adenovirus, иммунофлюоресценция

1175 руб.

  • Выявление возбудителя аденовирусной инфекции (Adenovirus), в основе которого лежит обнаружение в биоматериале комплексов антигена аденовируса с меченными флюорохромом антителами.
  • Синонимы русские
  • Аденовирусная инфекция.
  • Синонимы английские
  • Adenovirus immunofluorescence.
  • Метод исследования
  • Иммунофлюоресценция.
  • Какой биоматериал можно использовать для исследования?
  • Мазок урогенитальный, мазок из носоглотки, мазок с конъюнктивы.
  • Как правильно подготовиться к исследованию?
  • Не принимать пищу в течение 2-3 часов до исследования, можно пить чистую негазированную воду.
  • Общая информация об исследовании

Аденовирусы – это ДНК-содержащие вирусы семейства Adenoviridae, из которых свыше 50 серотипов болезнетворны для человека, наиболее часто заболевания вызывают серотипы 1-8, 11, 35, 37, 40 и 41.

Аденовирусы широко распространены и встречаются как в виде единичных случаев, так и в виде эпидемических вспышек. Источник инфекции – больной человек или вирусоноситель, у которых вирусы выделяются до 3-7-го дня болезни с отделяемым верхних дыхательных путей и конъюнктивы и до 3 недель с фекалиями.

Путь передачи – воздушно-капельный или пищевой. Инкубационный период в среднем составляет 5-7 дней.

Аденовирусы вызывают развитие острых заболеваний, протекающих с преимущественным поражением органов дыхания, глаз и лимфатических узлов. Наиболее частыми клиническими формами аденовирусной инфекции являются ОРВИ, фарингит, фарингоконъюнктивальная лихорадка, тонзиллит, средний отит и эпидемический кератоконъюнктивит.

Возможно поражение органов желудочно-кишечного тракта с аденовирусным гастроэнтеритом (у детей гастроэнтерит обусловлен серотипами 40 и 41). Аденовирусная инфекция может быть причиной инфекционно-аллергических заболеваний, таких как астматический бронхит, ларинготрахеит и др.

Обычно болеют дети, особенно младшего возраста, у которых инфекция протекает тяжелее (с бронхиолитами, пневмониями и т. д.).

Аденовирусная инфекция нередко встречается у иммунокомпрометированных лиц (перенесших трансплантацию органов или костного мозга), поражая трансплантированные органы и системы (гепатит при трансплантации печени, геморрагический цистит или паренхиматозное поражение почек при трансплантации почек), однако при генерализации инфекции могут также страдть легкие, кишечник и центральная нервная система. Аденовирусная инфекция часто встречается при СПИДе и чаще всего затрагивает мочеполовой и желудочно-кишечный тракт.

Генерализация инфекции чаще наблюдается у детей и иммунокомпрометированных лиц и может привести даже к летальному исходу; как правило, она обусловлена 3-м, 7-м, 21-м и 30-м серотипами вируса.

В некоторых случаях аденовирус может быть причиной острого геморрагического цистита и других заболеваний мочеполовой системы, а серотипы 1, 6, 12 и особенно 7 способны вызывать спорадический энцефалит и менингоэнцефалит (в том числе как осложнения после ОРВИ).

У пациентов с гипогаммаглобулинемией может развиваться хронический менингоэнцефалит, обусловленный аденовирусами 7-го, 12-го и 32-го серотипов.

Для диагностики аденовирусной инфекции применяют методы культивирования вируса, определение его антигена или ДНК в тканях или крови, а также серологические методы (4-кратное увеличение титра антитела в парных сыворотках).

Наиболее быстрый и высокоспецифичный (до 90  %) способ диагностики аденовирусной инфекции – иммунофлюоресцентная микроскопия. Она основана на непосредственном связывании антигенов аденовируса в биоматериале с меченными флюорохромом антителами с образованием комплексов антиген-антитело и последующей их микроскопии в ультрафиолетовом свете.

Под воздействием ультрафиолета флюорохром начинает светиться, что позволяет быстро выявить антиген аденовируса.

Для чего используется исследование?

  • Для выяснения причин аденовирусной инфекции и ее мониторинга.
  • Для контроля за эффективностью лечения аденовирусной инфекции.
  • Для дифференциальной диагностики заболеваний, протекающих со сходными симптомами (наряду с другими тестами).

Когда назначается исследование?

  • При клинических симптомах аденовирусной инфекции, при конъюнктивите, геморрагическом цистите, фарингите.
  • При обследовании контактных лиц (по эпидемиологическим показаниям).
  1. Что означают результаты?
  2. Референсные значения: не обнаружено.
  3. Причины положительного результата:
  • инфицирование аденовирусами.
Читайте также:  Токсидермия: симптомы и лечение народными средствами, причины

Причины отрицательного результата:

  • отсутствие аденовирусной инфекции;
  • низкое содержание аденовирусов в исследуемом биоматериале.



  • Также рекомендуется
  • Кто назначает исследование?
  • Инфекционист, офтальмолог, пульмонолог, гастроэнтеролог, терапевт, педиатр.
  • Литература
  1. Кишкун А. А. Иммунологические и серологические исследования в клинической практике.  – М. : «Медицинское информационное агентство», 2006. – 536 с.
  2. Baum S.G. Adenovirus. In: Principles and practice of infectious disease / G.L. Mandell, Bennett J.E., Dolin R (Eds) ; 6th ed. – Churchill Livingstone, Philadelphia, PA 2005. – 2701 p.
  3. Chernecky C.C. Laboratory tests and diagnostic procedures / C.C. Chernecky, B.J. Berger; 5th ed. – Saunder Elsevier, 2008. – 1232 pp.

Источник: https://helix.ru/kb/item/10-034

Риф исследование что. Реакция иммунофлуоресценции (риф) или метод флуоресцирующих антител (мфа). Как трактовать результаты серологических исследований

Реакция иммунофлюоресценции (РИФ) — серологическая реакция, позволяющая выявить антитела к известным антигенам. Метод заключается в микроскопии окрашенных мазков.

Данную реакцию используют в иммунологии, вирусологии и микробиологии. Она позволяет определить наличие вирусов, бактерий, грибов, простейших и ИКК.

РИФ очень широко применяется в диагностической практике для обнаружения вирусных и бактериальных антигенов в инфекционном материале.

Метод основан на способности флюорохрома вступать в связь с белками, не нарушая при этом их иммунологической специфичности. В основном применяется при диагностике инфекций мочеполовых путей.

Различают следующие методы проведения реакции иммунофлюоресценции: прямой, непрямой, с комплементом. Прямой метод заключается в окрашивании материала флюорохромами. Благодаря способности антигенов микробов или тканей светиться в УФ-лучах люминесцентного микроскопа, они определяются как клетки с ярко окрашенной каймой зеленного цвета.

Непрямой метод заключается в определении комплекса антиген+антитело. Для этого опытный материал обрабатывается антителами антимикробной кроличьей сыворотки, предназначенной для диагностики.

После того как антитела свяжутся с микробами, их отделяют от не связавшихся и обрабатывают антикроличьей сывороткой, помеченной флюорохромом.

После этого комплекс микроб+анимикробные антитела+анитикроличьи антитела определяется с помощью ультрафиолетового микроскопа также, как и при прямом методе.

Реакция иммунофлюоресценции незаменима при диагностике сифилиса. Под воздействием флюорохрома возбудитель сифилиса определяется как клетка с желто-зеленой каймой.

Отсутствие свечения означает, что пациент не заражен сифилисом. Этот анализ часто назначается при положительной реакции Вассермана.

Данный метод очень эффективен при диагностике, так как позволяет определить возбудителя на ранних стадиях заболевания.

Кроме того, что РИФ позволяет диагностировать сифилис, его также применяют для определения наличия таких возбудителей как хламидии, микоплазма, трихомонады, а также возбудителей гонореи и генитального герпеса.

Для проведения анализа используют мазки или венозную кровь. Процедура взятия мазка совершенно безболезненная и не представляет никакой опасности. К сдаче данного анализа необходимо подготовиться. За двенадцать часов до него не рекомендуется пользоваться средствами гигиены, такими как мало или гели.

Также иногда по показаниям врача проводиться провокация. Для этого рекомендуют прием острой пищи или алкоголя или проводится инъекция провоцирующего вещества, например гоновакцина или пирогенал.

Помимо этого промежуток между приемом антибактериальных препаратов и сдачей анализа должен быть не менее четырнадцати дней.

При оценке результатов следует учитывать тот факт, что свечение наблюдается не только у живых бактерий, но и у мертвых, особенно это относится к хламидиям. После курса антибиотиков мертвые клетки хламидий также обладают свечением.

При правильной подготовке пациента и соблюдении техники взятия мазка, данный анализ позволяет определить заболевания на ранних стадиях, что очень важно для своевременного лечения. Положительными сторонами данного метода является короткие сроки получения результата, простота выполнения и небольшая стоимость анализа.

К недостаткам можно отнести то, что для проведения анализа необходимо достаточно большое количество исследуемого материала. Кроме того, оценку результатов может проводить только опытный специалист.

Источник: https://pro-kozhu.ru/rif-issledovanie-chto-reakciya-immunofluorescencii-rif-ili-metod/

Реакция иммунофлуоресценции (РИФ), или метод флуоресцирующих антител (МФА)

При данном методе используют явление люминесценции.

Сущность явления люминесценции заключается в том, что при поглощении различных видов энергии (световой, электрической и др.) молекулами некоторых веществ их атомы переходят в возбужденное состояние, а затем, возвращаясь в исходное состояние, выделяют поглощенную энергию в виде светового излучения.

В РИФ люминесценция проявляется в виде флуоресценции — это свечение, возникающее в момент облучения возбуждающим светом и прекращающееся сразу после его окончания.

Многие вещества и живые микроорганизмы обладают собственной флуоресценцией (так называемой первичной), однако интенсивность ее очень мала. Вещества, обладающие интенсивной первичной флуоресценцией и используемые для придания флуоресцирующих свойств нефлуоресцирующим веществам, получили название флуорохромы. Такая наведенная флуоресценция называется вторичной.

Для возбуждения флуоресценции при люминесцентной микроскопии чаще всего используют ультрафиолетовую или сине-фиолетовую часть спектра (длина волны 300—460 нм). Для этих целей в лабораториях имеются люминесцентные микроскопы различных моделей — МЛ-1—МЛ-4, «Люмам».

В вирусологической практике применяют два основных метода люминесцентной микроскопии: флуорохромирования и флуоресцирующих антител (или РИФ).

Флуорохромирование — это обработка препаратов флуорохромом с целью увеличения силы и контрастности свечения их.

Наибольший интерес представляет флуорохром акридиновый оранжевый, который вызывает полихроматическую флуоресценцию нуклеиновых кислот.

Так, при обработке препаратов этим флуорохромом дезоксирибонуклеиновая кислота ярко флуоресцирует зеленым цветом, а рибонуклеиновая — рубиново-красным.

Метод РИФ заключается в том, что антитела, соединенные с флуорохромом, сохраняют способность вступать в специфическую связь с гомологичным антигеном. Образующийся комплекс антиген + антитело в связи с присутствием в нем флуорохрома обнаруживают под люминесцентным микроскопом по характерному свечению.

Для получения антител используют высокоактивные гипериммунные сыворотки, из которых выделяют антитела и метят их флуорохромом. В качестве флуорохрома наиболее часто используют ФИТЦ-флуоресцеин изотиоционат (зеленое свечение) и РСХ-родамин сульфохлорид (красное свечение). Антитела, меченные флуорохромом, называют конъюгатом.

Методика приготовления и окрашивания препаратов заключается в следующем:

  • готовят на предметных стеклах мазки, отпечатки из органов или на покровных стеклах — инфицированную культуру клеток; можно использовать и гистосрезы;
  • препараты подсушивают на воздухе и фиксируют в охлажденном ацетоне при комнатной температуре или при минус 15 °С (от 15 мин до 4—16 ч);
  • окрашивают по прямому или непрямому методу; ведут учет под люминесцентным микроскопом по интенсивности свечения, оцениваемому в крестах.

Параллельно готовят и окрашивают препараты от здорового животного — контроль.

Различают два основных метода применения флуоресцирующих антител: прямой и непрямой.

Прямой метод (одноступенчатый). На фиксированный препарат наносят конъюгат (флуоресцирующую сыворотку к предполагаемому вирусу), выдерживают 30 мин при температуре 37 °С во влажной камере. Затем препарат отмывают от несвязанного конъюгата физиологическим раствором (pH 7,2 — 7,5), подсушивают на воздухе, наносят нефлуоресцирующее масло и исследуют под микроскопом.

Прямой метод позволяет обнаружить и идентифицировать антиген. Для этого нужно иметь на каждый вирус флуоресцирующую сыворотку.

Непрямой метод (двухступенчатый). На фиксированный препарат наносят немеченую сыворотку, содержащую антитела к предполагаемому вирусу, выдерживают 30 мин при 37 °С, отмывают несвязанные антитела.

На препарат наносят флуоресцирующую антивидовую сыворотку, соответствующую виду животного — продуцента гомологичных противовирусных антител, выдерживают 30 мин при 37 °С.

Затем препарат отмывают от несвязанных меченых антител, подсушивают на воздухе, наносят нефлуоресцирующее масло и исследуют под люминесцентным микроскопом.

Антивидовые сыворотки получают, иммунизируя глобулинами животных тех видов, которые служат продуцентами антивирусных антител. Так, если антивирусные антитела получали на кроликах, то используют флуоресцирующую антикроличью сыворотку.

Непрямой метод позволяет не только обнаружить и идентифицировать антиген, но и выявить и определить титр антител. Кроме того, этим методом можно обнаруживать одной меченой сывороткой антигены различных вирусов, так как он основан на использовании антивидовых сывороток. Чаще применяют антикроличьи, антибычьи, антилошадиные сыворотки и сыворотки против глобулинов морской свинки.

Разработаны несколько модификаций непрямого метода. Наибольшего внимания заслуживает метод с использованием комплемента.

Метод заключается в том, что на фиксированный препарат наносят инактивированную нефлуоресцирующую специфическую сыворотку и комплемент морской свинки, выдерживают 30 мин при 37 °С, промывают, и для выявления комплекса антиген + антитело + комплемент наносят флуоресцирующую антикомплементарную сыворотку, выдерживают 30 мин при 37 °С, промывают, подсушивают на воздухе и исследуют под люминесцентным микроскопом.

Достоинства РИФ: высокая специфичность и чувствительность; простота техники постановки; требуется минимальное количество компонентов. Это экспресс-метод диагностики, так как в течение нескольких часов можно получить ответ.

К недостаткам можно отнести субъективизм в оценке интенсивности свечения и, к сожалению, иногда флуоресцирующие сыворотки бывают плохого качества. В настоящее время РИФ широко применяют в диагностике вирусных болезней животных.

Источник: https://www.activestudy.info/reakciya-immunofluorescencii-rif-ili-metod-fluoresciruyushhix-antitel-mfa/

Метод Иммунофлюоресценции — Медицинский Центр Био-Лайн

Это определение наличия антител класса IgM к следующим инфекциям:

  1. RSV (pеспираторно-синцитиальный вирус).
  2. Adenovirus type 3
  3. Influenza virus type A (H1N1)
  4. Influenza virus type A (H3N2)
  5. Influenza virus type B
  6. Parainfluenza virus type 1
  7. Parainfluenza virus type 2
  8. Parainfluenza virus type 3
  9. Parainfluenza virus type 4
  10. Bordetella pertussis
  11. Bordetella parapertussis
  12. Mycoplasma pneumoniae
  13. Coxsackie virus тип B1
  14. Coxsackie virus тип A7
  15. Echo virus тип 7
  16. Chlamydia pneumoniae
  17. Haemophilus influenzae
  18. Klebsiella pneumoniae
  19. Legionella pneumophila серотип 16
  20. Legionella pneumophila серотип 126
  • Результат: качественно, отдельно по каждой позиции в формате: «Отрицательный» или «Положительный».
  • Исследуемый материал: кровь (сыворотка).
  • Специалисты, которых может заинтересовать исследование: терапевты, инфекционисты, пульмонологи и др.

Мозаика «Центральная нервная система», (IgG), иммунофлюоресценция (РНИФ)

Это определение наличия антител класса IgG к следующим инфекциям:

  1. Rubella virus
  2. Measles
  3. Mumps
  4. Varicella zoster virus
  5. Adenovirus type 3
  6. EBV, капсидный антиген
  7. Treponema pallidum
  8. Toxoplasma gondii
  9.  HSV type 1
  10.  HSV type 2
  11. Coxsackie virus type B1
  12. Coxsackie virus type A7
  13. Echovirus тип 7
  14. Borrelia afzelii
  15. Borrelia burgdorferi sensu stricto
  16. Borrelia garinii
  17. CMV
  18. Haemophilus influenzae
  19. Listeria monocytogenes 1/2а
  20. Listeria monocytogenes 4b
  1. Результат: качественно, отдельно по каждой позиции в формате: «Отрицательный» или «Положительный».
  2. Исследуемый материал: кровь (сыворотка).
  3. Примечание: Лабораторное заключение содержит рекомендации по дальнейшей тактике проведения лабораторных исследований для уточнения положительного результата в количественном/полуколичественном формате.
  4. Специалисты, которых может заинтересовать исследование: невропатологи, инфекционисты и др.
Читайте также:  Причины головокружения при болезнях сердца: тахикардии, инсульте, инфаркте

Мозаика «Инфекционный артрит», (IgG), иммунофлюоресценция (РНИФ)

Это определение наличия антител класса IgGк следующим инфекциям:

  1. Varicella zoster virus
  2. Influenza virus type A (H1N1)
  3. Influenza virus type A (H3N2)
  4. Influenza virus type B
  5. Yersinia enterocolitica O:3
  6. Yersinia enterocolitica O:6
  7. Yersinia enterocolitica O:9
  8. Toxoplasma gondii
  9. Borrelia afzelii
  10. Borrelia burgdorferi sensu stricto
  11. Borrelia garinii
  12. Chlamydia trachomatis
  • Результат: качественно, отдельно по каждой позиции в формате: «Отрицательный» или «Положительный».
  • Исследуемый материал: кровь (сыворотка).
  • Примечание: Лабораторное заключение содержит рекомендации по дальнейшей тактике проведения лабораторных исследований для уточнения положительного результата в количественном/полуколичественном формате.
  • Специалисты, которых может заинтересовать исследование: ревматологи, инфекционисты, терапевты и др.

Антитела (IgG) к вирусу Varicella Zoster (VZV), иммунофлюоресценция

  1. Это определение наличия антител класса IgG к вирусу Varicella Zoster (VZV).
  2. Результат: качественно, в формате: «Отрицательный» или «Положительный».
  3. Исследуемый материал: кровь (сыворотка).
  4. Специалисты, которых может заинтересовать исследование: инфекционисты, невропатологи, терапевты и др.

Mозаика TORCH, (IgG), иммунофлюоресценция (РНИФ)

Это определение наличия антител класса IgGк следующим TORCH–инфекциям:

  1. Toxoplasma gondii
  2. Rubella virus
  3. HSV type1/2
  4. CMV
  • Результат: качественно, отдельно по каждой позиции в формате: «Отрицательный» или «Положительный».
  • Исследуемый материал: кровь (сыворотка).
  • Примечание: Лабораторное заключение содержит рекомендации по дальнейшей тактике проведения лабораторных исследований для уточнения положительного результата в количественном/полуколичественном формате.
  • Специалисты, которых может заинтересовать исследование: инфекционисты, гинекологи и др.

IgGк Treponemapallidum (РИФ)

  1. Это определение наличия антител класса IgG к Treponema pallidum (РИФ).

  2. Результатполуколичественно: отрицательный/слабоположительный (2+)/ положительный (3+ или 4+)
  3. Исследуемый материал: кровь (сыворотка).

  4. Специалисты, которых может заинтересовать исследование: инфекционисты, дерматологи, венерологии др.

IgМ к Treponemapallidum (РИФ)

  • Это определение наличия антител класса IgМ к Treponema pallidum (РИФ).
  • Результат полуколичественно: отрицательный/ слабоположительный (2+)/ положительный (3+ или 4+)
  • Исследуемый материал: кровь (сыворотка).
  • Специалисты, которых может заинтересовать исследование: инфекционисты, дерматологи, венерологи и др.

Скрининг – ANA (антинуклеарные антитела), иммунофлюоресценция (РНИФ)

Это определение наличия антител к ядерным компонентам клетки (диагностика системной красной волчанки, с-ма Шёгрена, поли/дерматомиозита, склеродермии и др.).

  1. Результат: качественно.
  2. Исследуемый материал: кровь (сыворотка).
  3. Примечание: Лабораторное заключение содержит рекомендации по дальнейшей тактике проведения лабораторных исследований для уточнения положительного результата в количественном/полуколичественном формате.
  4. Специалисты, которых может заинтересовать исследование: терапевты, ревматологи, нефрологи и др.

Скрининг – ANCA (Антинейтрофильные цитоплазматические антитела), иммунофлюоресценция (РНИФ)

  • Это определение наличия антител к цитоплазматическим антигенам (диагностика васкулитов (гранулематоз Вегенера, микроскопический полиангиит, синдром Черджа-Страусс, «pauci-immune» некротизирующий гломерулонефрит, узелковый полиартериит), неспецифического язвенного колита.
  • Результат: качественно.
  • Исследуемый материал: кровь (сыворотка).
  • Примечание: Лабораторное заключение содержит рекомендации по дальнейшей тактике проведения лабораторных исследований для уточнения положительного результата в количественном/полуколичественном формате.
  • Специалисты, которых может заинтересовать исследование: терапевты, ревматологи, нефрологи, гастроэнтерологи, отоларингологи и др.

Источник: https://bio-line.org/metod-immunoflyuoresczenczii/

Реакции иммунофлюоресценции (техника постановки реакции)

06.05.2010г.

Из антигена готовят препараты на тонких хорошо обезжиренных предметных стеклах, на обратной стороне которых обозначены кружки диаметром 1 см. Запаянным концом пастеровской пипетки круговыми движениями распределяют антиген в пределах кружка, и высушенный на воздухе мазок фиксируют в течение 5 мин в чистом ацетоне.

После фиксации стекла помещают во влажную камеру. Инактивированные испытуемые сыворотки крови разводят в 200 раз изотоническим раствором натрия хлорида. Для проведения первой фазы реакции на помещенные во влажную камеру препараты наносят испытуемые сыворотки.

Для того, чтобы покрыть препарат, достаточно 1 капли сыворотки. После этого влажную камеру закрывают и помещают в термостат при температуре 35 °С на 30 мин. По истечении этого времени препараты вынимают из влажной камеры, промывают в течение 10 мин в двух порциях изотонического раствора натрия хлорида и помещают в штатив для высушивания.

После высушивания препараты вновь помещают во влажную камеру и наносят по капле разведенной по титру флюоресцирующей сыворотки против глобулинов человека. Вторую фазу реакции проводят при комнатной температуре, после чего препараты 10 мин промывают в изотоническом растворе натрия хлорида, высушивают и монтируют для люминесцентной микроскопии.

Монтирование препаратов заключается в том, что на них стеклянной палочкой наносят маленькие капли забуференного глицерина (1 часть фосфатного буфера при рН 7,4 и 9 частей глицерина), накрывают их тонкими, хорошо обезжиренными предметными стеклами, на которые стеклянной палочкой наносят по капле нелюминесцирующее иммерсионное масло (диметилфталат). Исследование препаратов производят в люминесцентном микроскопе или в люминесцентном устройстве ОИ-17.

Степень свечения трепонем, зависящая от количества антител в сыворотке крови, обозначается плюсами. Свечение считается положительным, если его оценивают как 4+, 3+ и 2+. Реакция иммунофлюоресценции-абсорбции с бледной трепонемой (FTA-ABS).

Используемый для реакции антиген представляет собой взвесь бледных трепонем из пораженных сифилисом яичек кролика, фиксированную ацетоном на предметном стекле. Можно также использовать лиофилизированные бледные трепонемы после их восстановления в изотоническом растворе натрия хлорида.

Инактивированную сыворотку инкубируют с сорбентом (трепонемы Рейтера) для абсорбирования неспецифических групповых антител. Затем сыворотку помещают пипеткой на антиген, находящийся на предметном стекле. Специфические антитела (глобулины) связываются бледными трепонемами.

После промывания к трепонемам на предметном стекле добавляют комплекс античеловеческого глобулина с флюоресцентным красителем (флюоресцеин — изотиоцианат). Этот комплекс связывается с человеческим глобулином на оболочке клеток бледных трепонем и может быть идентифицирован методом флюоресцентной микроскопии.

По прошествии не менее 2 ч по степени флюоресценции сыворотку можно классифицировать как нереактоспособную, пограничную или реактоспособную. Реакция, обозначаемая двумя плюсами или больше, свидетельствует об инфекции.

Появления реактоспособности можно ожидать примерно в начале 3-й недели после заражения, а у нелеченных больных она обнаруживается постоянно.

Сыворотка остается реактоспособной и через несколько лет после успешного лечения раннего сифилиса, а у больных, получивших адекватное лечение при позднем сифилисе — на протяжении десятилетий. Главными достоинствами реакции FTA-ABS являются довольно высокая специфичность и чувствительность, а также быстро наступающая реактоспособность.

Положительная FTA-ABS может иметь решающее значение для диагностики сомнительных случаев, особенно при положительных реакциях VDRL или автоматизированной реакции микрогемагглютинации (АМНА-ТР), используемых для скрининга. Реакция 19S IgM-FTA-ABS.

При идентификации антител IgM к бледным трепонемам реакцией FTA-ABS с использованием конъюгата анти-IgM в качестве реагента выявлялись ложноположительные и ложно отрицательные результаты. Реакция 19S IgM-FTA-ABS в этом отношении является наиболее точным, специфичным методом.

В целях отделения крупных молекул 19S IgM от более мелких молекул 7S IgM используется методика ультрацентрифугирования, адсорбирования на белке А и гель-фильтрация с применением ультрагеля АсА 34 с трисбуфером при рН 8,0 на колонке К 26/100 при объеме геля 300 мл, скорости потока 27 мл/ч и температуре 24 °С. В этой системе первый пик элюата содержит фракцию 19S IgM.

В процессе фильтрования отделяются непрочные иммунные комплексы. Использование фракции 19S IgM в реакции FTA-ABS обеспечивает высокую специфичность, устраняя возможность неспецифических, ошибочных результатов.

«Болезни передающиеся при половых контактах»,Ю.К.Скрипкин

Читайте далее:

Источник: https://www.meddr.ru/bolezni_peredauschiesya_pri_polovyh_kontakta/sifilis/diagnostika_sifilisa/8065.html

Реакция иммунной флуоресценции

Реакция иммунной флуоресценции

Реакция иммунофлуоресценции основана на обнаружении иммунного комплекса, образованного путем взаимодействия антигена и антитела, меченного флуоресцентной меткой. Имеются прямой, непрямой, антикомплементарный варианты постановки реакции иммунофлуоресценции.

Непрямой вариант РИФ может быть использован при индикации антигенов возбудителей пневмоэнтеритов в биологическом материале — в инфицированной культуре клеток, мазках-отпечатках из респираторных органов, проб фекалий, соскобов со слизистой тонкого кишечника больных и павших телят.

Для диагностики респираторных инфекций используют мазки-отпечатки из пораженных органов дыхания. Для диагностики желудочно-кишечных заболевавний препараты готовят, используя 10—20%- ную суспензию проб фекалий, которую центрифугируют в течение 5—7 минут при 3000—4000 об/мин. Супернатант удаляют, осадок взмучивают и, используя тщательно обезжиренные стекла, готовят мазок.

Если в качестве испытуемого материала используется кишечник, то вначале слизистую подсушивают фильтровальной бумагой, а затем готовят мазки-отпечатки. Приготовленные препараты высушивают на воздухе, фиксируют в охлажденном ацетоне в течение 5—10 мин. В качестве контроля готовят препараты аналогично методике, описанной выше, используя материал от клинически здоровых животных.

На зафиксированные препараты наносят специфическую сыворотку и помещают их во влажную камеру, расположенную в термостате на 30—45 мин. Затем препараты тщательно промывают, используя 0,01М фосфатный буфер рН 7,2—7,4 и после подсушивания наносят антивидовую сыворотку, меченную ФИТЦ, с последующей инкубацией при тех же условиях.

По истечении экспозиции препараты снова тщательно промывают, подсушивают и просматривают в люминесцентном микроскопе (объектив х 90). В качестве контроля используют нормальную сыворотку. Препараты готовят аналогично опытным.

Непрямой вариант РИФ является более чувствительным. При его постановке используется антикомплементарная флуоресцирующая сыворотка.

При этом формируется многокомпонентный иммунный комплекс, который значительно легче обнаружить при люминесцентной микроскопии.

Препараты последовательно, в указанном выше режиме обрабатываются специфической сывороткой, комплементом, а затем — антикомплементарной флуоресцирующей сывороткой.

  • Оценка результатов РИФ осуществляется по интенсивности специфической флуоресценции:
  • ++++ — изумрудно-зеленое свечение в цитоплазме инфицированных клеток;
  • +++ — интенсивное зеленое свечение перинуклеарной зоны цитоплазмы.
  • Позитивным результатом считается наличие специфической флуоресценции в исследуемом материале на три и четыре плюса.

Подробности Раздел: БОЛЕЗНИ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ ЖИВОТНЫХ

Источник: http://ZooVet.info/vet-knigi/107-zyvotnovodstvo/bolezni-zh-kh/6328-reaktsiya-immunnoj-fluorestsentsii

Трепонемные тесты

Реакция иммобилизации бледных трепонем (РИБТ). Обязательным условием является исключение перед обследованием приема больным антибиотиков, которые оказывают токсическое действие на бледные трепонемы, вызывая их неспецифическое обездвижение.

Положительные результаты РИБТ обнаруживаются примерно с середины вторичного свежего периода сифилиса, и могут длительно сохраняться после проведенного лечения. При необходимости метод используют для выявления АТ в СМЖ, это исследование отличает высокая специфичность, но низкая чувствительность (около 40 %).

РИБТ мало пригодна для диагностики ранних форм сифилиса ввиду позднего (не ранее 8–9 недель от момента заражения) появления АТ-иммобилизинов; метод может давать ложноположительные результаты, в особенности у больных с аутоиммунной патологией, злокачественными заболеваниями, диабетом.

Кроме того, РИБТ – достаточно сложный, трудоемкий и дорогостоящий анализ, требующий высокой квалификации персонала и наличия вивария, в связи с чем в последние годы он используется лишь в отдельных лабораториях.

В диагностике РИБТ применяется как реакция-арбитр при расхождении результатов других серологических исследований, для дифференцирования ложноположительных результатов и при установлении диагноза поздних форм сифилиса.

Реакция связывания комплемента с трепонемным антигеном (РСК с ТА).Чувствительность метода – около 80 %, специфичность – 98 %.

Метод входил в состав комплекса стандартных серологических реакций на сифилис, регламентированного приказом Минздрава СССР № 1161 от 02.09.1985 «О совершенствовании серологической диагностики сифилиса».

В настоящее время использование этой реакции, как и РСК с кардиолипиновым антигеном, ограничено отдельными лабораториями.

Реакция иммунофлуоресценции (РИФ). Для диагностики сифилиса используют несколько модификаций РИФ: РИФ-ц – для выявления АТ в СМЖ, РИФ-200 (тестируемую сыворотку перед реакцией разводят в 200 раз); РИФ-абс (РИФ с абсорбцией), IgM-РИФ-абс (для определения АТ IgM).

По чувствительности и специфичности РИФ-абс не уступает РИБТ, но выполнение этого метода намного проще. Результаты РИФ-абс становятся положительными с 3–й недели после заражения (до появления твердого шанкра или одновременно с ним), это метод ранней диагностики сифилиса.

Нередки положительные результаты исследования спустя много лет после полноценного лечения раннего сифилиса, а у больных с поздним сифилисом – на протяжении десятилетий.

Показания для выполнения РИФ-абс:

  • положительные результаты НТТ у беременных при отсутствии клинических и анамнестических данных, свидетельствующих о сифилисе;
  • обследование лиц с различными соматическими и инфекционными заболеваниями, при которых отмечают положительные результаты НТТ;
  • обследование лиц с клиническими проявлениями, характерными для сифилиса, но с отрицательными результатами НТТ;
  • ранняя диагностика сифилиса;
  • в части случаев – как критерий успешности противосифилитического лечения: переход положительной РИФ-абс в отрицательную после лечения является 100% критерием излеченности сифилиса.

IgM–РИФ–абс применяют для раздельного выявления АТ классов Ig, что представляет особый интерес при диагностике врожденного сифилиса, когда АТ к трепонеме, синтезированные в организме ребенка, представлены IgM, а АТ IgG имеют материнское происхождение. Показаниями к проведению этого исследования являются: диагностика врожденного сифилиса; оценка результатов лечения раннего сифилиса.

РИФ обладает высокой чувствительностью (98,5%) и специфичностью (99,6%) практически при всех формах сифилиса. Недостатками РИФ являются: невозможность автоматизации исследования и учета результатов; трудности приготовления качественного антигена из взвеси бледных трепонем, полученных из яичка зараженного кролика; субъективизм в оценке результатов.

Реакция пассивной гемагглютинации (РПГА). Сопоставление результатов, полученных при использовании РПГА и РИБТ, РИФ–абс, КСР, МРП показало высокую чувствительность и специфичность РПГА при диагностике сифилиса, совпадающую с результатами РИФ–абс.

РПГА может быть выполнена в качественном и количественном вариантах, существуют их макро- и микромодификации. Количественный метод РПГА позволяет оценить концентрацию специфических трепонемных АТ в крови. Титры от 1 : 640 и ниже характерны для пациентов, леченных по поводу сифилиса в прошлом. Более высокие титры – обычно для активной нелеченной инфекции.

Положительные результаты РПГА, как правило, отмечают спустя 3 недели после появления твердого шанкра и далее у пациентов, перенесших сифилис, в течение многих лет, нередко пожизненно.

Чувствительность РПГА составляет 76% при первичном сифилисе; 100% при вторичном сифилисе; 97% при скрытом сифилисе; 94% при позднем сифилисе. Специфичность РПГА выше, чем специфичность РИФ–абс, составляет 99%.

Благодаря соотношению высокой специфичности, чувствительности, простоты выполнения, стандартизации реагентов среди трепонемных тестов для серодиагностики сифилиса РПГА стабильно занимает лидирующее место в клинической практике в мире.

Особые преимущества ИФА заключаются: в высокой чувствительности и специфичности метода; автоматизации постановки реакции; высокой степени стандартизации; возможности исследования большого количества образцов сывороток; в количественном учете и объективной документации полученных результатов; возможности одновременного определения титра противотрепонемных АТ разных классов (IgG и IgM) в одном образце; пригодности для ранней диагностики сифилиса и диагностики врожденного сифилиса; в удобстве применения для тестирования крови в службе переливания крови; применимости в качестве подтверждающего специфического трепонемного теста. Чувствительность ИФА 98–100%, специфичность 96–100%.

К недостаткам ИФА можно отнести: непригодность для исследования единичных образцов; более длительный срок до получения результата, и меньший срок годности ИФА-наборов, например, по сравнению с РПГА.

Иммунный блот (ИБ). Одним из современных методов диагностики сифилиса является ИБ для определения АТ IgG либо IgM к определенным АГ бледной трепонемы.

Метод обладает высокой чувствительностью (до 100%,), специфичностью (98%) и воспроизводимостью (100%). Исследование дает возможность изучения спектра АТ сразу к нескольким АГ T.pallidum, применения высокоочищенных рекомбинантных и пептидных АГ, снижающих до минимума неспецифическую реактивность сывороток.

Все это определяет возможность предпочтения применения метода ИБ перед другими трепонемными тестами для верификации диагноза сифилиса в сложных случаях, в частности, для диагностики сифилиса во второй половине инкубационного периода, скрытого врожденного сифилиса в первые дни жизни ребенка, для выявления скрытого сифилиса у лиц со слабым гуморальным ответом, а также для дифференцирования ложноположительных результатов других тестов.

Источник: https://www.cmd-online.ru/vracham/spravochnik-vracha/treponemnye-testy/

Непрямая риф. Особенности проведения и основные результаты реакции иммунофлуоресценции (РИФ, метод Кунса). Пункция регионарных лимфатических узлов

При данном методе используют явление люминесценции.

Сущность явления люминесценции заключается в том, что при поглощении различных видов энергии (световой, электрической и др.) молекулами некоторых веществ их атомы переходят в возбужденное состояние, а затем, возвращаясь в исходное состояние, выделяют поглощенную энергию в виде светового излучения.

В РИФ люминесценция проявляется в виде флуоресценции — это свечение, возникающее в момент облучения возбуждающим светом и прекращающееся сразу после его окончания.

Многие вещества и живые микроорганизмы обладают собственной флуоресценцией (так называемой первичной), однако интенсивность ее очень мала. Вещества, обладающие интенсивной первичной флуоресценцией и используемые для придания флуоресцирующих свойств нефлуоресцирующим веществам, получили название флуорохромы. Такая наведенная флуоресценция называется вторичной.

Для возбуждения флуоресценции при люминесцентной микроскопии чаще всего используют ультрафиолетовую или сине-фиолетовую часть спектра (длина волны 300-460 нм). Для этих целей в лабораториях имеются люминесцентные микроскопы различных моделей — МЛ-1-МЛ-4, «Люмам».

В вирусологической практике применяют два основных метода люминесцентной микроскопии: флуорохромирования и флуоресцирующих антител (или РИФ).

Флуорохромирование
— это обработка препаратов флуорохромом с целью увеличения силы и контрастности свечения их.

Наибольший интерес представляет флуорохром акридиновый оранжевый, который вызывает полихроматическую флуоресценцию нуклеиновых кислот.

Так, при обработке препаратов этим флуорохромом дезоксирибонуклеиновая кислота ярко флуоресцирует зеленым цветом, а рибонуклеиновая — рубиново-красным.

Метод РИФ заключается в том, что антитела, соединенные с флуорохромом, сохраняют способность вступать в специфическую связь с гомологичным антигеном. Образующийся комплекс антиген + антитело в связи с присутствием в нем флуорохрома обнаруживают под люминесцентным микроскопом по характерному свечению.

Для получения антител используют высокоактивные гипериммунные сыворотки, из которых выделяют антитела и метят их флуорохромом. В качестве флуорохрома наиболее часто используют ФИТЦ-флуоресцеин изотиоционат (зеленое свечение) и РСХ-родамин сульфохлорид (красное свечение). Антитела, меченные флуорохромом, называют конъюгатом.

Методика приготовления и окрашивания препаратов заключается в следующем:

  • готовят на предметных стеклах мазки, отпечатки из органов или на покровных стеклах — инфицированную культуру клеток; можно использовать и гистосрезы;
  • препараты подсушивают на воздухе и фиксируют в охлажденном ацетоне при комнатной температуре или при минус 15 °С (от 15 мин до 4-16 ч);
  • окрашивают по прямому или непрямому методу; ведут учет под люминесцентным микроскопом по интенсивности свечения, оцениваемому в крестах.

Параллельно готовят и окрашивают препараты от здорового животного — контроль.

Различают два основных метода применения флуоресцирующих антител: прямой и непрямой.

Прямой метод (одноступенчатый)
. На фиксированный препарат наносят конъюгат (флуоресцирующую сыворотку к предполагаемому вирусу), выдерживают 30 мин при температуре 37 °С во влажной камере. Затем препарат отмывают от несвязанного конъюгата физиологическим раствором (pH 7,2 — 7,5), подсушивают на воздухе, наносят нефлуоресцирующее масло и исследуют под микроскопом.

Прямой метод позволяет обнаружить и идентифицировать антиген. Для этого нужно иметь на каждый вирус флуоресцирующую сыворотку.

Непрямой метод (двухступенчатый)
. На фиксированный препарат наносят немеченую сыворотку, содержащую антитела к предполагаемому вирусу, выдерживают 30 мин при 37 °С, отмывают несвязанные антитела.

На препарат наносят флуоресцирующую антивидовую сыворотку, соответствующую виду животного — продуцента гомологичных противовирусных антител, выдерживают 30 мин при 37 °С.

Затем препарат отмывают от несвязанных меченых антител, подсушивают на воздухе, наносят нефлуоресцирующее масло и исследуют под люминесцентным микроскопом.

Антивидовые сыворотки получают, иммунизируя глобулинами животных тех видов, которые служат продуцентами антивирусных антител. Так, если антивирусные антитела получали на кроликах, то используют флуоресцирующую антикроличью сыворотку.

Непрямой метод позволяет не только обнаружить и идентифицировать антиген, но и выявить и определить титр антител. Кроме того, этим методом можно обнаруживать одной меченой сывороткой антигены различных вирусов, так как он основан на использовании антивидовых сывороток. Чаще применяют антикроличьи, антибычьи, антилошадиные сыворотки и сыворотки против глобулинов морской свинки.

Разработаны несколько модификаций непрямого метода. Наибольшего внимания заслуживает метод с использованием комплемента.

Метод заключается в том, что на фиксированный препарат наносят инактивированную нефлуоресцирующую специфическую сыворотку и комплемент морской свинки, выдерживают 30 мин при 37 °С, промывают, и для выявления комплекса антиген + антитело + комплемент наносят флуоресцирующую антикомплементарную сыворотку, выдерживают 30 мин при 37 °С, промывают, подсушивают на воздухе и исследуют под люминесцентным микроскопом.

Достоинства РИФ: высокая специфичность и чувствительность; простота техники постановки; требуется минимальное количество компонентов. Это экспресс-метод диагностики, так как в течение нескольких часов можно получить ответ.

К недостаткам можно отнести субъективизм в оценке интенсивности свечения и, к сожалению, иногда флуоресцирующие сыворотки бывают плохого качества. В настоящее время РИФ широко применяют в диагностике вирусных болезней животных.

Источник: https://luchshie-voliery-dlya-sobak.ru/nepryamaya-rif-osobennosti-provedeniya-i-osnovnye-rezultaty-reakcii/

Ссылка на основную публикацию